蛇毒怎么采集和保存

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一、蛇毒的临床应用

蛇毒是毒蛇腺体中分泌出来的一种毒液，含有复杂的蛋白质毒素，其成分是蛋白质或多肽类物质，还含有多种重要的酶类，这些物质和酶类具有很强的毒理作用，因而引起国内外医药界的普遍重视，并进行了许多研究工作。近年来，研究蛇毒的论文很多，已经成为医学和生物学的重要研究课题之一。目前研究蛇毒的主要内容有如下三个方面：一是蛇毒的化学成分和毒、药理作用的研究；二是抗蛇毒血清的研究'；三是蛇毒应用的研究。我国对蛇毒研究和临床应用的进展很快，并取得了可喜的成果。例如昆明动物研究所从浙江蝮蛇毒中提纯的磷酸二酯酶，该产品质量达到了国外同类产品的先进水平；中国医科大学蛇毒研究室从蛇岛的蝮蛇和江浙蝮蛇毒中分离出"蛇毒抗栓酶"；解放军二三八医院与沈阳药学院合作，，从东北陆生的蝮蛇毒中分离出"清栓酶"制剂。根据大量临床实践证明，蛇毒有如下的药用价值：

1.抗癌作用 癌症是危害人类健康的三大疾病之一，目前尚无特效疗法。各国医学家正在将蛇毒的研究作为攻克这一堡垒的新的研究方法。1953年美国医学家哥拿切和杜克等人用眼镜蛇毒治疗115例癌症病例，发现有明显的止痛效果，蛇毒对部分癌症病例，有使肿瘤生长缓慢，控制转移甚至完全变成瘢痕化的作用。1967年印度医学家拉柯特从印度产的眼镜蛇毒中提取出一种叫细胞毒素P6的物质，对吉田肉瘤有明显的抑制作用。他又从马来西亚红口蝮蛇毒中提纯出一种精氨酸酯酶，对癌症转移到血管壁上形成的斑块有消除作用。近年沈阳部队总医院利用蝮蛇毒配合化学治成骨肉瘤患者，使患者的存活时间明显延长。

2．蛇毒治疗胃、十二指溃疡病胃、十二指肠溃疡是消化系统的常见病，其疗法虽多，但疗效不高。中国医科大学研究室用蛇毒治疗胃、十二指肠溃疡6例，经钡餐及胃镜复查，仅用药30天左右，有5例完全治愈，1例溃疡缩小。临床实践还证明，利用蛇毒治疗消化道溃疡，具有止痛、增食和促进睡眠和增加体重的优点，所以值得推广应用。

3．治疗脑血栓及脉管炎 解放军二三八医院，应用蝮蛇毒分离出来的清栓酶制剂治疗脑血栓及脉管炎800余例，治疗后观察，发现对脑血栓病人有促进睡眠和增加饮食的作用；

4.还有由中国蛇协会长林可干研究创立的SMBL-09系列的专有技术应用于心脑血管血栓病的防治取得显著效果,多年来一直临床应用.

二、蛇毒的采集

蛇毒的采集方法甚多，下面介绍几种比较常用的方法：

(一)咬皿法 采毒工具可用小玻璃杯、小瓷、碟瓷匙、培养皿等。操作方法：以左手提着蛇的颈部，同时让蛇身自然地放置在工作台的台面上，务求减少对蛇身的刺激，以防止其扭动。右手把取毒工具送人毒蛇口内，让其咬住取毒工具，毒液便从毒牙滴出，待停止排毒后，再取出取毒工具。如不排毒，可用另一手的拇指、食指顺着毒腺由后向前适当挤压，直至蛇毒基本排完为止，然后再换另1条蛇。对从野外捕捉回来的蛇，需在室内放置1夜以后方可进行首次采毒。如果1人操作不方便，特别是初学者最好2个人共同配合来完成。

(二)咬膜皿法 本法取毒工具是玻璃膜皿，系一种特制的圆形小玻璃皿。玻璃皿的口上牢固地绑盖着一层透明而具有一定弹性的尼龙薄膜，玻璃皿底部的一边连接一个末端封闭的玻璃管，玻璃管略为弯曲向上与玻璃皿底部约至120度左右的倾斜度，皿底略向管口倾斜。玻璃管主要用以盛集从玻璃皿内流人的毒液，又可以作为取蛇毒时的把手，沿着玻璃Ⅲ的环口边缘有一条稍微向内凹陷的浅沟，以便能牢固地固定于尼龙薄膜上。此外，玻璃皿面的大小，皿边的高低，边角的倾斜度等均务求与毒蛇口形相符。如供眼镜蛇、眼镜王蛇、金环蛇等取毒的玻璃皿，一般应大于银环蛇、竹叶青等的取毒皿，其皿边的高度及边角的倾斜度亦相应地有所增加。又因五步蛇及蝰蛇等毒蛇的毒牙较长，故其取毒皿皿边应更高一些才能适用，否则会影响取毒量，甚至会折损毒蛇的毒牙"

本法取毒的具体操作方法是：左手提蛇，让蛇身自然地放置在工作台皿上，右手握着玻璃膜皿的管部，皿口向上，将皿边轻放蛇嘴，当蛇张口之际，顺势将玻璃皿送入蛇口，内，并尽可能深入达到蛇的口角处，待毒蛇紧咬玻璃皿，毒牙咬穿尼龙薄膜，即可看到有毒液流人玻璃皿中。待毒液排完为止，然后再稍为扭动一下管子，促使毒蛇把口松开，这时可顺势取出玻璃膜皿，这样整个取毒工作即可告终。

咬膜皿法取蛇毒的优点是：(1)操作简单、方便，成功率高；(2)可避免毒蛇咬器皿时损坏口腔粘膜，从而减少口腔炎等疾病的发生；(3)减少取毒时毒蛇口腔内的微生物、脱落的上皮组织、粘液、牙龈损伤时流出的血液、泥砂及其它杂物对毒液的污染，能保证蛇毒干净无杂质。但是亦有不足的一面，就是玻璃膜皿需要特制加工，市场上不易买到；毒牙已脱落的毒蛇难于使用本法取毒。目前国内能生产咬膜皿的单位有广西医学院蛇毒研究室等，各专业户需要购买者可直接与该单位联系解决。

(三)减压咬膜皿法 本法是由咬膜皿法改良而来的。只是在带有侧管小漏斗的上口绑盖一层塑料薄膜，漏斗底通过橡皮塞与离心管相连，漏斗侧管经橡皮管接于水泵上。取毒前，打开水龙头抽气，使装置系统内面形成负压(负压大小可调节水速大小或于水泵与漏斗间接上三叉管，用螺栓来调节)，取毒操作方法与咬膜皿法相似。对于毒量少且毒液比较粘稠的蛇毒，采用此法取毒比较适宜。但应用本法取毒几次后，塑料薄膜孔隙逐渐变大，减压效力下降，必须重新更换薄膜方可使用。对毒牙粗大的毒蛇不宜用本法取毒。

（四)挤压取毒法 左手握紧蛇颈部，放低蛇头，然后用右手的食、拇两指在两侧毒腺部位由后向前推动挤压，毒液即能从蛇的毒牙流出。在取毒时必须小心将蛇头对准盛毒容器，使流出的毒液全部收集在盛蛇毒的玻璃管中。取蛇毒的持续时间可直至无毒液挤压出来为止。 　　本法优点是比较简便，易于操作，对毒牙已经脱落的毒蛇也可采用此法取毒。其缺点是不够安全，如一不小心有被咬伤的可能；且蛇毒常有被污染或混入杂质的可能，使蛇毒质量不够纯净。

(五)研磨取毒法 将毒蛇麻醉或处死后，小心将毒腺摘出，然后将其与生理盐水或注射用水研磨后，经过离心沉淀，再进行提取蛇毒的各种程序，这种方法较复杂，目前很少使用。

此外，尚有用特制的电极刺激毒蛇的毒腺部位，促使其排毒。但此法对蛇体影响较大，此方法也很少采用。

三、采蛇毒的注意事项

(一)安全措施 工作人员一定要严格遵守操作规程，小心谨慎，每次操作时至少要有2个人以上，以便互相照顾，避免发生意外。操作时应戴上防护眼镜、口罩、帽子和橡皮手套等。特别是在刮取干毒的过程中更须注意，以免干毒粉末侵入呼吸道引起中毒。制备或称取干毒时，应在关闭好门窗的室内进行，以免干毒粉末到处飞扬。操作人员的手不能有伤口，若有伤口一定要戴上橡皮手套。工作室内及工作场地不准有闲人出入，同时须备有蛇伤急救药品，一旦被蛇咬伤或发生中毒，应立即进行急救处理。

(二)取毒的注意事项 有如下五种：

1．取毒季节以5-10月份最适宜，其中又以7-8月份排毒最多。每次取毒间隔时间，短则半月1次，最好是1个月采毒1次，频繁的取毒会影响蛇的健康。为了取得较多的蛇毒，在取毒前的1星期，只供水不投食物，取毒之后，因蛇毒已经排空，消化液不足，应等3-4天之后才投料。

2．在集中关养毒蛇期间，每天必须进行数次安全检查，如发现蛇笼或蛇场有破损之处，应及时加以更换或修补，并随时清点蛇的数量，一旦发现蛇数量减少，应及时找出原因，当机立断，及时给予处理解决，以防万一。如因蛇箱或蛇笼破损造成毒蛇外逃，必须立即寻捕归笼；如出现有蛇吃蛇现象，应将吞吃同类蛇的大蛇检查出来，进行另行关养；如系天敌侵害，则须加强防备措施。发现死蛇或病蛇，应立即取出或及时隔离治疗，以免传染给其它健康蛇。 　　3．取毒时，用手抓蛇颈部时松紧程度要合适，如果过紧，则有碍毒蛇的咬皿动作，并可能使蛇窒息，造成死亡；抓得过松则有被蛇咬伤或逃跑的危险。总之，采毒时要尽量减少对蛇的不良刺激，使蛇有舒服感觉，这样才能增加排毒量。

毒蛇每次排毒量的多少是与季节，蛇的大小及健康情况等因素有关的。某研究部门对产自浙江和江西的250条(体重500-1500克)五步蛇的测定结果表明，平均每条蛇排毒量约为159．5毫克。福建大蛇园对7年中先后饲养约35条福建北部产的五步蛇(平均体重711克)排毒量平均每条约203．4毫克，最高1次排毒量达542．4毫克，与其它几种毒蛇比较，五步蛇的排毒量较高(表5-1)。

4．取完毒液后应立即将毒蛇放入蛇笼或蛇箱里。但在人笼时，务必先放蛇身，然后再把头扔进去，以防松手时毒蛇会转头咬伤人。

5．玻璃膜皿上绑盖的薄膜，切勿使用含硫的橡皮或易脱色的薄膜，以免因杂质脱落而污染蛇毒。同时毒液要保持清洁，切勿染上灰尘和泥沙，如有毒蛇毒牙掉进蛇毒内要及时取出，毒蛇口腔有炎症时不能挤毒，以免脓血污染毒液，影响蛇毒的质量。 　　四、蛇毒的生化成分及干毒制备

新鲜蛇毒是一种略带腥味的粘稠液体，在室温下只要放置24小时，就会发生腐败，变质变臭；放置在冰箱中最多只能保存2-4星期。但经过制备所得的干蛇毒则可保存数十年之久，所以蛇毒必须制成干品后才能长期保存。那么，蛇毒的生物化学成分是什么呢，

(一)蛇毒的生化成分 不同蛇种，其蛇毒的生化组成和毒理性质各有差异，但是同属的蛇毒其化学成分仍是基本相同的。

1．蛇毒一般特性 蛇毒系一种蛋白质混合物。新鲜毒液因蛇种不同，所呈的颜色亦不同，如五步蛇毒为无色液体；眼镜蛇及蝮蛇毒为淡黄色半透明液体。振摇时易起泡沫，呈弱酸性，有特殊腥味，含水量65-8096，比重为1．03-1．06，常温下易失活，置冰箱中一星期后有部分失去活力。由于蛇毒系多肽、蛋白质、酶类物质，所以遇重金属离子、乙醇、酚类物质时，立即产生沉淀；高温环境产生絮状沉淀；遇氧化剂(高锰酸钾、过氧化氢)、还原剂(亚硫酸钠)、强酸、强碱等易被破坏，亦易被蛋白水解分解；紫外线照射也能使蛇毒失活。经甲醛处理后使毒性失掉，但仍保持其抗原性，或变成类毒素。因此，在吸取蛇毒时，一定要注意这些特性，以免使蛇毒遭受破坏而失性；另一方面，当人被毒蛇咬伤后，也可根据蛇毒这些特性，进行积极的抢救和处理，会收到"药到病除"的效果。

2．毒性成分 一旦被毒蛇咬伤，会使人致于死命的是蛇毒中所含的各种毒素，其中包括神经毒素、血循毒素以及各种毒素酶等。

(1)神经毒素：神经毒素主要存在于银环蛇、金环蛇和海蛇的毒液中。眼镜蛇、蝮蛇亦含有此毒素。其主要化学成分是一种由15-18种氨基酸，由61-74个氨基酸数所结合而成的肽链。其中最主要的氨基酸是赖氨酸、精氨酸、天门冬氨基酸，但亦含有半胱氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸和色氨酸等成分。

(2)血循毒素：血循毒素主要存在于五步蛇、竹叶青等蛇毒中，眼镜蛇、蝮蛇亦含有此毒素。血循毒素的种类很多，成分亦十分复杂，其中以心脏毒素对机体的毒性作用最广泛，危害性也最大。心脏毒素的成分是由15-17种氨基酸、60个氨基酸链所组成的碱性多肽，分子量为6000-7000个。

(3)凝血毒素：主要存在于五步蛇、蝮蛇及竹叶青等毒蛇中。凝血毒素的主要成分是含有一种叫类凝血酶或凝血酶一样的酶。此酶能直接催化纤维蛋白原分子中的特定部位，使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。

(4)其他蛇毒酶：现已查明，蛇毒中含有的毒性酶不下25种，其中主要的有卵磷脂酶A，、蛋白水解酶、胆碱脂酶、透明质酸酶、三磷酸腺苷酶、磷酸二脂酶、抗胆碱脂酶、核糖核酸酶、去氧核糖核酸酶、肽链内断酶和5-核苷酸酶等。因这些酶对蛇伤诊疗关系不大，故不一一赘述。

(二)干蛇毒的制备方法 有如下几点：

1．真空干燥法将冷藏的新鲜蛇毒移入真空干燥器内。妥当放置、密封后即可开动抽气装置进行抽气，同时在干燥器中放入干燥剂(如硅胶、氯化钙、五氧化二磷等)，并在其上面铺上一层纱布。干燥剂的数量一定要足够，否则蛇毒中的水分蒸发不尽而影响蛇毒质量。

在抽气过程中，要随时观察容器里的蛇毒液蒸发的情况。随着水分的蒸发，毒液渐变成粘状物，易产生气泡，此时要调节抽气开关，防止气泡外溢。如发现气泡向容器外溢出，必须立即关闭活塞或停止抽气，待容器内气泡逐渐消失以后，再继续进行抽气。如此反复多次，直至容器内的毒液开始凝结成固体状态，再继续抽至真空，然后关闭活塞停止抽气。在真空状态下，蛇毒需在原装置里继续静置14-24小时，，力求使蛇毒中的水分完全被蒸发，使蛇毒变成鳞状小块或大小不等的松脆的金黄色透明颗粒为止，即成干燥的粗毒。将粗毒装入密封消毒无菌容器中，在干燥、避光、防潮的条件下保存备用。，2．真空冰冻干燥法将整个真空干燥器放置在一个较大的特制桶内，桶底及干燥器周围均堆满冰块。在制备过程中，先将蛇毒按前述方法进行抽气真空干燥。亦可将蛇毒先放置入冰箱内预冻数小时，待冻成块状后，再移入真空干燥器内进行干燥。

3．低温真空冰冻干燥法冷却剂为干冰(即固态二氧化碳)，此法比较精密，更能保证蛇毒的质量。但是此种方法要求操作技术较高，而且要有很高尖的设备，所以只能在较大的研究单位方能使用。

(三)干蛇毒的保存 干蛇毒吸水性强，不耐热，在高温、潮湿、阳光的影响下，均易变质失去酶的活性。所以必须做好以下几点才能长期保存：

1．妥善盛装将干燥冰冻好的蛇毒用锋利的小刀从干燥器内刮下，装入清洁消毒过的玻璃管或小瓶中盛装。

2．低温冷藏将盛装好的干燥蛇毒用蜡或将管口熔化封好，存放于室内阴凉通风处或冰箱内冷藏。

3．避免光线照射盛装的器皿上一定要标上蛇毒的名称、采毒日期、批号，为了避免光线照射，外面最好使用金属有色纸或锡箔避光。

4．防潮防湿为了长期保存备用，最好每隔一段时间(一年左右)再次进行真空干燥一次，以免回潮影响蛇毒质量。